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ATCC細胞觀(guān)察培養時(shí)的主要事項說(shuō)明

發(fā)布時(shí)間: 2022-03-10  點(diǎn)擊次數: 563次
   ATCC細胞轉化試驗有形態(tài)計數法、MTT法和同位素法三種。MTT法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法,MTT是一種噻唑鹽,化學(xué)名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液為黃橙色。小鼠脾細胞受到ConA作用后發(fā)生增殖活化,其胞內線(xiàn)粒體琥珀酸脫氫酶活性相應升高,MTT作為其底物參與反應,形成藍色的甲臜(Formazan)顆粒沉積于細胞內或細胞周?chē)?jīng)鹽酸─異丙醇溶解后為藍色溶液,可用酶標測定儀測定細胞培養物的OD值,測定波長(cháng)570nm,根據OD值的大小計算反應體系中細胞增殖程度。
  ATCC細胞觀(guān)察培養時(shí)的主要事項說(shuō)明:
  1.肉眼觀(guān)察細胞培養基顏色,再借助顯微鏡觀(guān)察細胞生長(cháng)情況,并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照(建議收到時(shí)的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細胞100X,200X各一張),這樣做可方便后期的對比。
  2.用75%的酒精消毒(75%的酒精的水要經(jīng)過(guò)殺菌處理)。
  3.嚴格按照在無(wú)菌環(huán)境下操作的原則,打開(kāi)細胞培養瓶。
  4.將細胞培養瓶?jì)鹊呐囵B基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(要換新的培養基培養細胞)。
  5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀(guān)察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
  6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
  7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。

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