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ATCC細胞篩選時(shí)的常用技術(shù)講解

發(fā)布時(shí)間: 2021-09-14  點(diǎn)擊次數: 622次
   ATCC細胞的說(shuō)明書(shū)中有關(guān)于細胞復蘇和傳代的詳細步驟。除說(shuō)明書(shū)外,還有另一份重要文件-COA(Certificate of Analysis)。COA中包含具體批次信息,如每管細胞的數量,建議復蘇使用的培養基用量,已知細胞的傳代代次等重要信息。
  部分培養基如DMEM,各廠(chǎng)商提供產(chǎn)品雖然名稱(chēng)相同,但成分也會(huì )有差異。為了保證細胞大的復蘇率和維持細胞特性,建議購買(mǎi)細胞的時(shí)候,同時(shí)購買(mǎi)ATCC細胞的培養基。
  篩選ATCC細胞株的兩種技術(shù)介紹:
  1.轉染質(zhì)粒后,單克隆方法篩選穩定細胞系
  對大多數細胞轉染效率較低。對于基因過(guò)表達,如果轉染效率達到40%,基因過(guò)表達尚可。但是對于基因干擾實(shí)驗,對轉染效率要求遠遠高于基因過(guò)表達,通常質(zhì)粒轉染無(wú)法滿(mǎn)足。
  另外,質(zhì)粒游離于細胞質(zhì)中,很快降解,無(wú)法滿(mǎn)足較長(cháng)時(shí)間的檢測項目;質(zhì)粒轉染整合幾率極低,穩定細胞株構建耗時(shí)耗力,且得率很低,往往需要挑取單克隆株。
  2.病毒感染篩選穩定ATCC細胞株
  病毒感染方法較質(zhì)粒轉染篩選單克隆方法更方便和高效,是目前主流的穩定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩轉細胞株,由于其高效整合、高效轉錄、高效表達、宿主范圍廣,感染效率高,且與細胞染色體整合而不發(fā)生基因重排,是制備穩定細胞株的理想載體。

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