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如何檢測ATCC細胞增殖情況呢?

發(fā)布時(shí)間: 2021-06-10  點(diǎn)擊次數: 665次
   直接計數法是簡(jiǎn)單的檢測ATCC細胞生長(cháng)的方法。計數細胞一般利用臺盼藍(臺盼藍不能透過(guò)活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不著(zhù)色。而死亡細胞的細胞膜通透性增高,可使染料進(jìn)入細胞內而使細胞著(zhù)色)。因此,鏡下未染色細胞認為是活細胞,而染色細胞認為是死亡細胞。
  檢測DNA合成法是目前檢測ATCC細胞增殖準確可靠的方法,常用的方法有:
  1.3H-胸腺嘧啶核苷滲入法(3H-TdR)
  胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA合成的前體物,處于S期的細胞不斷地攝取TdR用以合成DNA。3H-TdR摻入法是將被放射性標記的3H-TdR摻入DNA合成期的細胞,細胞內3H-TdR摻入量的多少可客觀(guān)反映細胞復制DNA能力的大小,從而問(wèn)接了解細胞增殖情況。通過(guò)檢測H放射活性即可反映DNA含量。
  2.BrdU檢測法
  BrdU中文全名為5-溴脫氧尿嘧啶核苷,為胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期)摻入,而后利用抗BrdU的抗體耦聯(lián)不同的酶,加入不同發(fā)光特性的底物,然后再通過(guò)比色法、化學(xué)發(fā)光檢測或熒光信號檢測底物強度等步驟,反映BrdU的摻入量。該方法不需要再和放射性物質(zhì)打交道。
  3.EdU檢測法
  BrdU雖然解決了接觸同位素的問(wèn)題,但該方法需要變性DNA后才能與抗體結合,但這就破壞了DNA雙鏈結構,對某些后續或同時(shí)進(jìn)行的試驗,如其他染料的結合染色有影響。現在有一種新的檢測方法能避免這種情況的發(fā)生-EdU檢測。EdU(5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物,但其連有的炔羥基團在天然化合物中很少見(jiàn),在細胞增殖時(shí)能夠插入正在復制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應可以進(jìn)行高效快速的細胞增殖檢測分析,可以有效地檢測處于S期的細胞百分數。與傳統的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比,更簡(jiǎn)單、快速、準確。

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